Είναι αποδεκτό ότι περίπου το 5-10% του πληθυσμού θα αναπτύξει κλινικά σημαντικό οζίδιο του θυρεοειδούς κατά τη διάρκεια της ζωής του. Μία από τις σημαντικότερες προκλήσεις για τους ενδοκρινολόγους είναι η αξιολόγηση αυτών των όζων του θυρεοειδούς. Αν και οι περισσότεροι όζοι του θυρεοειδούς είναι καλοήθεις, η πιο κοινή ένδειξη για χειρουργική επέμβαση είναι ο αποκλεισμός της διάγνωσης του καρκινώματος.

Τα τρέχοντα κριτήρια για τις χειρουργικές αποφάσεις βασίζονται στην κυτταροπαθολογική αξιολόγηση των κυττάρων που λαμβάνονται από την αναρρόφηση λεπτής βελόνας (FNA), μια τεχνική που εισήχθη ως προεγχειρητική εξέταση για όζους του θυρεοειδούς στη δεκαετία του 1970 και επικυρώθηκε ως αξιόπιστο τεστ σε πολλές μελέτες από τότε. Με την υιοθέτηση του FNA του θυρεοειδούς, η πιθανότητα να απαιτηθεί χειρουργική επέμβαση για έναν όζο του θυρεοειδούς μειώθηκε περίπου κατά 50%, από 65-70%σε 35-40%, με ταυτόχρονη μείωση του αριθμού των θυρεοειδεκτομών που πραγματοποιήθηκαν. Παρόλο που η FNA αυτή τη στιγμή θεωρείται η καλύτερη αρχική διαγνωστική εξέταση για την αξιολόγηση ενός όζου του θυρεοειδούς, δεν μπορεί να κάνει διάκριση μεταξύ καλοήθων και κακοήθων όγκων θυλακοειδούς θυλακοειδούς. Ακόμα και έμπειροι κυτταρολόγοι αντιμετωπίζουν προβλήματα με δείγματα FNA για τα οποία τα κυτταρολογικά χαρακτηριστικά ούτε επιβεβαιώνουν ούτε αποκλείουν κακοήθεια. Στους ασθενείς που εμφανίζονται θυλακοειδείς βλάβες θυρεοειδούς συνιστάται να υποβληθούν σε χειρουργική επέμβαση θυρεοειδεκτομής. Ουσιαστικά, οι γιατροί και οι ασθενείς πρέπει να αποφασίσουν προεγχειρητικά αν θα υποβληθούν σε ολική θυρεοειδεκτομή βάσει ανεπαρκών κλινικών πληροφοριών. Ειδικά οι περιπτώσεις που χαρακτηρίζονται ως ύποπτες ή απροσδιόριστες οδηγούν σε χειρουργική επέμβαση θυρεοειδούς. Οι τρέχουσες εκτιμήσεις δείχνουν ότι τα καρκινώματα του θυρεοειδούς βρίσκονται τελικά στο 10-20% των βλαβών που διαβάζονται ως όγκοι ωοθυλακίων από την κυτταρολογία FNA. Κατά συνέπεια, η διάγνωση του καρκίνου επιβεβαιώνεται με παθολογική εξέταση χειρουργικών τεμαχίων μόνο στο ένα τρίτο περίπου των ασθενών που χειρουργήθηκαν για καρκίνο ή υποψία καρκίνου, πράγμα που σημαίνει ότι τα άλλα δύο τρίτα των χειρουργημένων ασθενών θα μπορούσαν να είχαν αποφύγει τη χειρουργική επέμβαση.

Έτσι, οι τρέχουσες πρακτικές για τη διαχείριση ενός ασθενούς με οζίδιο θυρεοειδούς που θεωρείται ωοθυλακική βλάβη από το FNA είναι συγκεχυμένες και φαινομενικά αυθαίρετες. Υπάρχει σαφής ανάγκη να αναπτυχθούν ακριβέστερες αρχικές διαγνωστικές εξετάσεις για όζους του θυρεοειδούς, ιδιαίτερα για εκείνους τους όζους που ταξινομούνται ως ωοθυλακικές βλάβες κατά την αρχική κυτταροπαθολογική ανασκόπηση και ενδεχομένως για άμεση μεταγενέστερη θεραπεία επίσης.

Ο πρώτος τρόπος αυτής της μελέτης είναι να εκμεταλλευτείτε όλες τις συσσωρευμένες πληροφορίες που έχουν παραχθεί από μοριακές αναλύσεις θυλακιδικών οζιδίων θυρεοειδούς από μελέτες μικροσυστοιχιών και μεταλλάξεων και να τις μεταφράσετε σε κλινική χρήση αναπτύσσοντας μια γρήγορη μοριακή ανάλυση που θα επιτρέπει ακριβή διάγνωση και άμεση τόσο η αρχική θεραπεία του ασθενούς όσο και η παρακολούθηση με μια απλή δειγματοληψία με λεπτή βελόνα. Υπάρχουν δύο τύποι μοριακής ανάλυσης που θα ενσωματώσουμε σε αυτή τη μελέτη. Το πρώτο είναι να αποκαλύψουμε ένα τυπικό μοριακό προφίλ με ανάλυση γονιδιακής έκφρασης γονιδιακών στόχων που περιγράφονται παραπάνω, που θα μας επιτρέψει να κάνουμε διάκριση μεταξύ διαφορετικών παθολογιών με ακρίβεια και βεβαιότητα. Το δεύτερο είναι να καθοριστεί η κατάσταση μετάλλαξης ορισμένων βασικών ογκογονιδίων που θα συμπληρώσουν τα δεδομένα ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης και θα βοηθήσουν στον λεπτομερή χαρακτηρισμό ενός οζιδίου. Πιο συγκεκριμένα, θα εξετάσουμε μια ομάδα μεταλλάξεων που αντιπροσωπεύουν τις πιο κοινές μεταλλάξεις σε διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς. Πρέπει να τονιστεί ότι θα εφαρμόσουμε τήξη υψηλής ανάλυσης (HRM) μια νέα μεθοδολογία για σάρωση μετάλλαξης που πραγματοποιείται στον ίδιο σωλήνα ή φρεάτιο στο οποίο ενισχύεται η γονιδιακή αλληλουχία. Είναι μια νέα εξαιρετικά γρήγορη μέθοδος για την ανίχνευση μεταλλάξεων σε μία μόνο δοκιμή λιγότερο από 2 ώρες με αποτέλεσμα εξαιρετικά γρήγορο έλεγχο.

Η δεύτερη διαδρομή αυτής της πρότασης είναι η χάραξη νέων ενδοκυτταρικών οδών σηματοδότησης που ελέγχουν τη μοίρα των όζων του θυρεοειδούς. Αυτό το μέρος της μελέτης θα 1) επιβεβαιώσει τα αποτελέσματα των μελετών γονιδιακής έκφρασης σε επίπεδο πρωτεΐνης και 2) θα αποκαλύψει πιθανούς μηχανισμούς παθολογίας του θυρεοειδούς. Θα λάβουμε χειρουργικά δείγματα διαφορετικών παθολογιών ή /και θα δημιουργήσουμε νέες κυτταρικές σειρές από ασθενείς με διαφορετικούς τύπους οζιδίων του θυρεοειδούς για να μελετήσουμε τις οδούς σηματοδότησης που μεταβάλλονται στις παθολογίες των όζων του θυρεοειδούς. Μας ενδιαφέρει ιδιαίτερα ο ρόλος των ιντεγκρινών και η προς τα κάτω σηματοδότησή τους στη λειτουργία του θυρεοειδούς. Υπάρχουν πλέον ουσιαστικά στοιχεία ότι ορισμένες ιντεγκρίνες όπως η ιντεγκρίνη α6β4 (Νικόλοπουλος et al., 2004; 2005) συνεργάζονται με κινάσες τυροσίνης υποδοχέα για τη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της μετανάστευσης σε φυσιολογικά κύτταρα και ότι η αυξημένη συνεργατική σηματοδότηση από αυτές τις ιντεγκρίνες και τους σχετικούς υποδοχείς τυροσίνης κινάσες συμβάλλει στην παθολογική κατάσταση του θυρεοειδούς αδένα (Ilario et al., 2003). Η αποκάλυψη σχετικών οδών και μοριακών μηχανισμών που συμβάλλουν στον παθολογικό τύπο των όζων του θυρεοειδούς, θα οδηγήσει στον εντοπισμό νέων στόχων διαγνωστικής, προγνωστικής ή θεραπευτικής αξίας και θα βοηθήσει στην κλινική αντιμετώπιση αυτής της νόσου.

Η μοριακή ταξινόμηση των ιστών είναι μια αναδυόμενη τεχνολογία που αναμφίβολα θα αλλάξει τον τρόπο διαχείρισης των ασθενών στο μέλλον. Αυτό το ερευνητικό σχέδιο χρησιμοποιεί αυτήν την τεχνολογία προκειμένου να παρέχει μια αξιόπιστη μέθοδο για τη μοριακή διάγνωση των όζων του θυρεοειδούς. Σκοπός της μελέτης μας είναι να εντοπίσουμε μια γονιδιακή υπογραφή που ενισχύει την ευαισθησία και την ειδικότητα της διάγνωσης των όζων του θυρεοειδούς σε σύγκριση με τις παραδοσιακές κυτταρολογικές τεχνικές και παρέχει μια μηχανιστική λογική αποκαλύπτοντας σχετικές οδούς σηματοδότησης. Η τρέχουσα διάγνωση λαμβάνεται συμβατικά με μορφολογική εξέταση τμημάτων βιοψίας ιστού, αλλά δεν είναι απολύτως αξιόπιστη λόγω της φύσης του ιστού του θυρεοειδούς. Ωστόσο, ενδέχεται να προκύψουν ασυμβατότητες εντός και μεταξύ παρατηρητών. Η μέθοδος κατάρτισης γονιδίου RT-qPCR βασισμένη στη γονιδιακή υπογραφή που περιγράφεται εδώ σε συνδυασμό με ανάλυση μετάλλαξης θα είναι ένα ακριβές εργαλείο για μοριακή διάγνωση ορισμένων παθολογιών του θυρεοειδούς όπως η παρουσία/απουσία καρκινικών ή προ-καρκινικών κυττάρων που δεν υποβάλλονται σε ενδο- και σφάλμα μεταξύ παρατηρητών. Η μέθοδος θα βοηθήσει στην ενίσχυση της διάγνωσης, ιδιαίτερα σε εκείνες τις περιπτώσεις στις οποίες είναι απαραίτητο να επιλυθούν οι αβεβαιότητες. Επιπλέον, η προτεινόμενη μεθοδολογία που βασίζεται στην ανίχνευση μιας πολυπαραμετρικής υπογραφής έκφρασης αναμένεται να αποφέρει την καλύτερη απόδοση στην ανίχνευση σε σύγκριση με μεμονωμένους προγνωστικούς παράγοντες. Η μέθοδος αναμένεται επίσης να έχει δυνητική προγνωστική αξία, επειδή το επίπεδο έκφρασης αυτών των γονιδίων θα συσχετιστεί με την τελική έκβαση των ασθενών με θυρεοειδή. Αναμένεται ότι πληροφορίες όπως αυτή που λαμβάνονται από αυτήν τη μέθοδο θα βοηθήσουν στην προσαρμογή της θεραπείας με βάση τα προφίλ κινδύνου των ασθενών.